奧林巴斯顯微鏡:熒光和DIC的組合
光漂白的影響減到*小⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺,熒光顯微鏡可以不破壞與其他技術相結合的熒光染料☧☬☸✡♁✙♆。,、':∶;,如微分干涉相差(DIC)✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴,霍夫曼調制對比度(HMC)☾☽❄☃,傳送暗場照明ⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ,相位相反的⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓。

我們的想法是找到一個感興趣的具體領域使用非破壞性的對比度增強技術㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉,然后在一個標本⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ,沒有搬遷的標本㈠㈡㈢㈣㈤㈥㈦,在顯微鏡切換熒光模式⒥⒦⒧⒨⒩⒪⒫⒬⒭⒮⒯⒰⒱⒲⒳⒴⒵❆❇❈❉❊†☨✞✝☥☦☓☩☯。這種類型的一個典型的實驗的結果示于圖1⓱⓲⓳⓴⓵⓶⓷⓸⓹⓺⓻⓼⓽⓾。圖1(a)示出的大鼠視網膜視神經神經節組織薄截面使用微分干涉對比成像☾☽❄☃。顯微照片ⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ,圖1(b)中示出的相同的視場✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅,但是這一次成像使用熒光照明(汞蒸氣燈和一個奧林巴斯WU過濾器立方體)細胞染色藍色熒光染料ⓣⓤⓥⓦⓧⓨⓩ,重氮鹽ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ,具體污漬磷脂在髓鞘⒥⒦⒧⒨⒩⒪⒫⒬⒭⒮⒯⒰⒱⒲⒳⒴⒵❆❇❈❉❊†☨✞✝☥☦☓☩☯。圖1(c)示出這兩種技術的組合使用❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣,以產生出漂亮的熒光染色鏡片疊加在微分干涉對比度的圖像的視網膜的神經節脂組織的顯微照片ⅲⅳⅴⅵⅶⅷⅸⅹⒶⒷⒸⒹ。此圖片是一個專門的記錄的熒光物鏡設計允許同時觀察熒光和微分干涉對比具有相同的目標⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺。

同時使用微分干涉相差(DIC)和熒光照明通常用來同時圖像標本的顯微鏡配置在圖2中示出㈠㈡㈢㈣㈤㈥㈦。DIC進行采用透射光提供由鎢鹵素燈的位置連接到顯微鏡的基礎上在一個燈箱ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ。通過視場光闌的光被反射到臺下聚光鏡由設在冷凝器的前焦平面通過渥拉斯頓棱鏡ⓣⓤⓥⓦⓧⓨⓩ。
試樣衍射的光首先通過客觀的后側焦點面附近定位在中間像平面與試樣未衍射的光通過干涉之前的第二Wollaston棱鏡❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣。同時①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯,紫外線燈發出的由水銀燃燒器通過一個激發過濾器☧☬☸✡♁✙♆。,、':∶;,然后由二向色鏡反射來自上述檢體上ⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ。二次發射的熒光通過附加的染色標本的發色基團被捕獲的目標和通過屏障過濾器⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺,對準目鏡和/或光電管✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅。此配置可用于圖像標本使用的技術(熒光和微分干涉對比)單獨或結合使用❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣。